Фрагмент документа "МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ХОЛЕРЫ".
6.4. Тесты дифференциации биоваров холерных
вибрионов O1
Определение чувствительности к диагностическим холерным фагам.
В лабораторной диагностике холеры используют бактериофаги
диагностические холерные классический и эльтор. При оценке результатов
проб с фагами необходимо ориентироваться на диагностический рабочий
титр (ДРТ), который обычно обозначают на этикетках. Определение
чувствительности к фагам проводят как с цельными препаратами, так и с
их 10-кратными разведениями до ДРТ в мясопептонном бульоне.
-2
Дифференциальный рабочий титр не ниже 1 х 10 .
Для постановки реакции в чашки разливают щелочной агар. После
застывания агара и подсушивания его в течение 30 мин. при температуре
37 ёC дно чашек делят на квадраты по количеству образцов фагов и
10-кратных разведений фага. В пробирку с 5 мл 0,5 - 0,7-процентного
питательного агара, расплавленного и охлажденного до 45 ёC, добавляют
0,1 - 0,2 мл 3 - 4-часовой бульонной культуры, тщательно смешивают и
выливают на поверхность агара. Чашки оставляют при комнатной
температуре с приоткрытыми крышками на 30 мин. В центр квадратов
наносят штампом-репликатором, стандартной петлей или тонко оттянутой
пастеровской пипеткой по капле фагов в соответствующих разведениях.
После подсыхания капель чашки переворачивают вверх дном и помещают в
термостат при температуре (37,0 +/- 0,5) ёC. Результаты учитывают
через 3 - 4 и 18 - 20 ч. Наличие лизиса в виде одного "стерильного"
пятна или группы мелких негативных колоний оценивается как
положительный результат.
Определение чувствительности к полимиксину В.
В расплавленный и остуженный до 45 ёC питательный агар (рН 7,2
+/- 0,1) добавляют полимиксин В из расчета 50 единиц на 1 мл среды.
После тщательного перемешивания среду разливают в чашки Петри. На
застывшие агаровые пластинки наносят обычной бактериологической петлей
18- или 3-часовую бульонную культуру. Результаты учитывают после
инкубирования посевов при температуре 37 ёC в течение 18 ч. Холерные
вибрионы биовара cholerae не растут на полимиксиновом агаре, для
холерных вибрионов биовара eltor - признак вариабелен.
Постановка реакции гемагглютинации.
На предметное стекло в чашке Петри помещают каплю 0,9-процентного
раствора хлорида натрия и суспендируют в ней петлей 18-часовую
агаровую культуру. Затем добавляют каплю 2,5-процентной взвеси куриных
эритроцитов, трижды отмытых 0,9-процентным раствором хлорида натрия.
Стекло покачивают до смешивания взвеси эритроцитов и вибрионов. При
положительной реакции в течение 1 мин. наступает склеивание
эритроцитов. Реакцию сопровождают двумя контролями: а) в каплю
0,9-процентного раствора хлорида натрия добавляют каплю 2,5-процентной
взвеси эритроцитов; б) в капле 0,9-процентного раствора хлорида натрия
суспендируют испытуемую культуру. Контроли должны быть отрицательными.
Для постановки пробы могут быть использованы эритроциты морской
свинки.
Постановка реакции Фогес - Проскауэра (на ацетилметилкарбинол).
Испытуемую культуру засевают в глюкозофосфатный бульон Кларка и
инкубируют при температуре (37,0 +/- 0,5) ёC в течение 1 - 3 сут.
Затем к 1 мл культуры добавляют 0,6 мл 6-процентного спиртового
раствора альфа-нафтола и 0,4 мл 40-процентного раствора едкого калия.
Пробирки встряхивают и помещают в термостат на 1 ч. При положительной
реакции среда окрашивается в розовый или ярко-красный цвет.
|
Фрагмент документа "МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ХОЛЕРЫ".