МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ХОЛЕРЫ. Методика. Главный государственный санитарный врач РФ. 15.01.02 МУ 4.2.1097-02

6.5. Тесты межвидовой дифференциации патогенных
                        для человека вибрионов
     
     Определение галофильности вибрионов.
     Суточную агаровую   культуру   исследуемого   штамма  засевают  в
1-процентную пептонную воду с 3-процентным раствором  натрия  хлорида.
Через  3  -  4 ч инкубации при температуре (37,0 +/- 0,5) ёC переносят
строго по 1 капле выросшей культуры в пептонную воду без NaCl,  с 7  и
10-процентным  раствором  натрия  хлорида.  Через  18 - 20 ч инкубации
оценивают рост культур по помутнению среды.
     К негалофильным  относятся V.  cholerae и V.  mimicus,  для роста
которых  достаточны  следовые  количества  соли  в   среде.   Вибрионы
остальных  видов,  за исключением некоторых штаммов V.  fluvialis и V.
metshnikovii,  не растут в 1-процентной пептонной воде без  добавления
натрия хлорида и устойчивы к значительным его концентрациям.
     Определение способности   вибрионов   к    росту    при    разных
температурах.
     Способность вибрионов к росту при температуре 4;  20; 30; 35; 40;
45 и 50  ёC  выявляют  при  посеве  суточных  культур  в  1-процентную
пептонную  воду с 0,5%  натрия хлорида для негалофильных вибрионов и с
1,5 - 2%  натрия хлорида  для  галофильных  вибрионов.  Наличие  роста
оценивают  визуально  в  сравнении с контролем.  Наблюдают за посевами
ежедневно в течение 2 недель.
     Определение нитратредуктазы.
     Суточную агаровую  культуру  засевают в 1 мл бульона Хоттингера с
0,1-процентного раствора азотно-кислого калия. После 2 суток инкубации
при  температуре  (37,0 +/- 0,5) ёC в посевы добавляют 0,5 мл реактива
Грисса.  В положительных случаях среда сразу же окрашивается в красный
цвет.
     К 1 - 2-суточной  культуре  в  бульоне  Хоттингера  с  0,1%  KNO3
добавляют  3  - 5 капель реактива,  представляющего собой смесь равных
объемов   0,1%   раствора   риванола   в   дистиллированной   воде   и
12-процентного   раствора  соляной  кислоты.  В  случае  положительной
реакции бульон окрашивается в красный цвет.
     Определение бета-галактозидазы.
     Суточную агаровую  культуру  засевают  на  скошенную  поверхность
агара,  содержащего  10%  лактозы.  Посевы  инкубируют 1 - 2 суток при
температуре (37,0 +/- 0,5) ёC.  Петлю выросшей культуры суспендируют в
0,25  мл  0,9%  раствора  натрия  хлорида,  добавляют  0,25 мл водного
раствора О-нитрофенил-бета-D-галактопиранозита  (ONPG)  и  помещают  в
термостат при (37 +/- 0,5) ёC. Реакцию учитывают через 20 мин., 1, 3 и
24 ч.  В  положительном  случае  взвесь  приобретает  желтую  окраску,
отрицательном - остается бесцветной.